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Medindo o rendimento da transcrição reversa?

Medindo o rendimento da transcrição reversa?


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Existe alguma medida que eu possa realizar após o RT que me permita verificar a eficiência que o procedimento teve? Nanodrop não pode ser usado como remanescente de RNA e medida de máscara de primers poli T, ou?


Nanodrop pode ser bom para os volumes, mas como você corretamente adivinhou, não é tão fácil distinguir DNA de RNA (e primers). Qubit (invitrogen) é um ensaio de quantificação baseado em corante sensível. Você pode usar isso para estimar o rendimento de cDNA. O kit contém diferentes corantes para DNA, RNA e estimativa de proteínas.


Trate com RNAse e especifique em 260.

Definitivamente, uma especificação pode ser usada. O coeficiente de extinção (Lei de Beers Lamberts) não calculará medindo NTPs, apenas dsDNA intacto.


Assista o vídeo: Transcrição (Dezembro 2022).